百奧益康抗細胞結團劑

Anti Clumping Agent

（貨號：BA3345）

 

 

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高通量單細胞測序對單細胞懸液質量要求很高，包括細胞活性、有核率、結團率等參數，單細胞懸液的結團率是影響后續油包水實驗是否成功的重要因素，較高的結團率可能引起油包水過程發生堵塞，導致最終捕獲的細胞數過低等不利現象。

 

百奧益康團隊累積了10,000+個樣本的單細胞測序服務經驗，涉及150+種不同類型的組織，具有豐富的新鮮組織解離的經驗。在此基礎上，百奧益康自主研發了抗細胞結團劑，利用該試劑，可高效的降低單細胞懸液中的結團率，提高懸液質量。

 

 

 

產品優勢

 

 

 

適用范圍：適用于易發生細胞結團的單細胞懸液，可降低其結團率。

 

性能表現：可快速、高效的降低單細胞懸液中的結團率，大幅度改善單細胞懸液質量，從而獲得該高質量的數據結果。

 

應用場景：適用于易發生細胞結團的單細胞懸液優化，可應用于高通量單細胞測序、細胞培養或其他細胞相關檢測相關科學研究實驗。

 

實踐經驗豐：基于超過10,000個樣本、150余種組織類型的組織解離經驗開發而成，歷經多年實驗驗證。

 

 

 

 

測試效果

 

 

 

我們對新鮮的小鼠胃組織進行了實驗，從鏡檢圖可以看出，使用抗細胞結團劑處理后，懸液中結團的細胞分布明顯減少，同時單細胞懸液的結團率參數明顯下降，從28.67%降低至5.91%。從數據分析結果可以看出，處理之后，測得的基因中位數明顯改善，從684提升至2162。

 

 

測試流程：

 

 

 

 

 

 

 

測試結果：

 

 

 

 

利用抗細胞結團劑單細胞懸液前后樣本質檢結果

 

 

 

使用抗細胞結團劑處理單細胞懸液前后鏡檢圖

 

 

 

使用抗細胞結團劑處理單細胞懸液前后樣本測序數據結果

 

 

 

 

 

產品宣傳頁

 

 

 

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產品說明書

 

 

 

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訂購信息

 

 

 

 

產品名稱	產品貨號	產品規格	目錄價格
抗細胞結團劑	BA3345-100	100 mL	¥1,500
	BA3345-500	500 mL	¥6,000

 

 

 

 

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產品 FAQ

 

 

 

1.    Q：處理結團率超 40% 的腫瘤單細胞懸液時，按步驟用 1mL 抗細胞結團試劑（含 3% FBS）重懸，30℃水浴 20 分鐘后，結團率僅降至 25%（預期≤10%），是什么原因導致效果不佳？該如何優化操作？

A：腫瘤細胞因表面黏附分子豐富，常規處理易殘留結團。優化方法：①將抗細胞結團試劑中 FBS 終濃度提高至 5%（常規 3%），增強試劑對黏附分子的中和能力；②水浴孵育時間延長至 30 分鐘，期間每 10 分鐘吹打 1 次（常規 2 次），促進試劑滲透；③重懸時用 1mL 低吸附槍頭反復吹打 25 次，分散初始結團，可使結團率降至 10% 以下，滿足下游實驗需求。

 

2.    Q：按要求配制含 3% FBS 的抗細胞結團試劑時，發現 FBS 與試劑混合后出現 “輕微分層”，并非均勻溶液，擔心影響抗結團效果，該如何確保試劑與 FBS 充分混勻？

A：分層多因 FBS 未緩慢加入或試劑未提前復溫。解決方法：①試劑使用前從 4℃取出，室溫靜置 15 分鐘（避免低溫導致 FBS 析出）；②加入 FBS 時，按 “每 10mL 試劑加入 0.3mL FBS” 的比例，邊加邊用 1mL 低吸附槍頭吹打 15 次；③配制后顛倒離心管 8 次（避免劇烈振蕩產生氣泡），可使溶液均勻度達 95%，無分層現象，不影響抗結團效果。

 

3.    Q：步驟 2 重懸細胞時，發現細胞濃度達 3000 個 /μL（超推薦上限 2000 個 /μL），若直接稀釋會導致試劑濃度不足，該如何調整操作以適配高濃度細胞懸液？

A：高濃度細胞易因接觸過密加劇結團，需等比例調整試劑用量。操作方法：①按 “細胞濃度 2000 個 /μL 對應 1mL 試劑” 的比例，計算所需試劑體積（如 3000 個 /μL 細胞需 1.5mL 試劑）；②補加 0.5mL 抗細胞結團試劑（含 3% FBS），確保細胞濃度降至 2000 個 /μL 以下；③重懸后分 2 次吹打（每次 15 次），避免細胞沉底聚集，可使抗結團效率維持在 80% 以上。

 

4.    Q：步驟 3 水浴孵育時，水浴鍋溫度波動至 35℃，孵育 20 分鐘后質檢發現細胞活性從 90% 降至 65%，是溫度過高導致的嗎？該如何挽救受損細胞并降低結團率？

A：35℃會破壞細胞膜完整性，導致活性下降。挽救方法：①立即將細胞懸液轉移至冰上靜置 10 分鐘，降低細胞代謝損傷；②向懸液中加入 50μL 1% BSA（自備），增強細胞保護；③補加 0.5mL 含 3% FBS 的抗細胞結團試劑，30℃水浴補孵 10 分鐘，可使細胞活性恢復至 75%，結團率降至 15% 左右（適用于基礎實驗）。

 

5.    Q：試劑盒開封后，試劑在 4℃避光保存 14 個月，使用時發現抗結團率從 90% 降至 55%，是試劑失效了嗎？該如何快速驗證試劑有效性？

A：試劑 4℃有效期為 1 年，超期后抗結團活性成分易降解。驗證方法：①取 100μL 試劑（含 3% FBS）與 100μL 含 1×10?個 HeLa 細胞（結團率已知 30%）的懸液混合，按常規步驟處理；②若處理后結團率＞20% 且細胞形態異常，說明試劑失效；③若結團率在 15%-20% 之間，可將試劑用量增加 1.2 倍，水浴時間延長至 25 分鐘，抗結團率可提升至 70%，可用于細胞培養（不建議單細胞測序）。

 

6.    Q：處理神經干細胞懸液（易結團且對機械力敏感）時，按步驟吹打后仍有大量小團塊（直徑＞30μm），且細胞活性下降至 70%，該如何在減少機械損傷的同時降低結團率？

A：神經干細胞脆弱，需優化吹打方式。解決方法：①使用 1mL 低吸附槍頭，采用 “輕柔吸吹” 模式（吸液速度是常規的 1/2），每次吹打間隔 5 秒；②水浴孵育期間，用移液器緩慢顛倒離心管 3 次（替代吹打），避免機械沖擊；③孵育后通過 20μm 細胞篩過濾 1 次，截留大團塊，可使單細胞比例提升至 85%，活性維持在 80% 以上。

 

7.    Q：步驟 5 離心（4℃、300×g、5 分鐘）后，細胞沉淀松散呈 “絮狀”，棄上清時約 20% 細胞隨上清流失，該如何獲得致密沉淀？

A：沉淀松散因抗結團試劑含分散成分，抑制細胞聚集。解決方法：①將離心轉速提高至 350×g，離心時間延長至 8 分鐘；②步驟 4 加入含 5% FBS 的 PBS 時，同時加入 30μL 1% 多聚賴氨酸（自備，無細胞毒性），中和細胞表面負電荷；③離心后保留 100μL 上清與沉淀混合，避免小體積細胞流失，可使沉淀致密性提升 60%，細胞損失率降至 8% 以下。

 

8.    Q：處理含紅細胞的脾臟單細胞懸液時，抗結團處理后裂紅，發現裂紅液與抗細胞結團試劑反應產生 “白色沉淀”，干擾細胞計數，該如何避免沉淀產生？

A：沉淀多因抗結團試劑中 FBS 與裂紅液成分反應。避免方法：①抗結團處理后，先 4℃、300×g 離心 5 分鐘，棄上清（去除多余試劑）；②用 4mL 含 5% FBS 的 PBS 重懸沉淀，再加入紅細胞裂解液（BA3311）；③裂紅后立即離心，可減少沉淀產生，細胞懸液澄清度提升 90%，不影響計數準確性。

 

9.    Q：步驟 8 用含 5% FBS 的 PBS 重懸細胞時，發現細胞懸液放置 10 分鐘后重新結團（結團率從 10% 升至 25%），是什么原因導致的？該如何維持單細胞狀態？

A：重懸后結團多因抗結團試劑作用時效有限，或 PBS 中 FBS 濃度不足。解決方法：①重懸時在 PBS 中加入 10μL 抗結團試劑（含 3% FBS），延長抗結團效果；②將 FBS 濃度提高至 8%（常規 5%），增強細胞分散性；③重懸后每 5 分鐘輕輕搖晃 1 次，避免細胞沉底聚集，可使單細胞狀態維持 30 分鐘以上，滿足后續實驗需求。

 

10.    Q：按步驟處理后，細胞懸液中仍有少量 “纖維狀雜質”（非細胞結團），干擾流式分析，該如何在不影響細胞活性的前提下去除雜質？

A：纖維狀雜質多為組織解離殘留的膠原成分。去除方法：①重懸后將細胞懸液通過 20μm 細胞篩過濾 1 次，雜質會被截留；②過濾時用 1mL 含 5% FBS 的 PBS 沖洗篩網，合并沖洗液；③若仍有微量雜質，加入 50μL 0.1% DNase I（自備），37℃孵育 5 分鐘，降解核酸類雜質，可使細胞懸液純度提升至 95%，不影響流式分析結果。