百奧益康死細(xì)胞去除緩沖液

Dead Cell Removal Solution

（貨號：BA3338）

 

 

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很多細(xì)胞實驗中對單細(xì)胞懸液質(zhì)量要求很高，包括細(xì)胞活性、有核率等參數(shù)，若懸液的細(xì)胞活性較低，會導(dǎo)致有效細(xì)胞識別不準(zhǔn)確、有效細(xì)胞及非細(xì)胞界限模糊、捕獲細(xì)胞數(shù)過高或過低，背景升高等不利現(xiàn)象。

 

百奧益康團隊累積了10,000+個樣本的單細(xì)胞測序服務(wù)經(jīng)驗，涉及150+種不同類型的組織，具有豐富的新鮮組織解離的經(jīng)驗。在此基礎(chǔ)上，百奧益康自主研發(fā)了死細(xì)胞去除緩沖液，利用該試劑盒，可高效的去除單細(xì)胞懸液中的死細(xì)胞，提高懸液質(zhì)量。

 

 

產(chǎn)品優(yōu)勢

 

適用范圍：哺乳動物單細(xì)胞懸液中死細(xì)胞的快速高效去除。

 

性能表現(xiàn)：可快速、高效的去除單細(xì)胞懸液中的死細(xì)胞，大幅度改善單細(xì)胞懸液質(zhì)量，從而獲得該高質(zhì)量的數(shù)據(jù)結(jié)果。

 

應(yīng)用場景：適用于含有大量死細(xì)胞的細(xì)胞懸液優(yōu)化，可應(yīng)用于高通量單細(xì)胞測序、細(xì)胞培養(yǎng)或其他細(xì)胞相關(guān)檢測相關(guān)科學(xué)研究實驗。

 

經(jīng)驗豐富：基于超過10,000個樣本、150余種組織類型的組織解離經(jīng)驗開發(fā)而成，歷經(jīng)多年實驗驗證。

 

 

 

測試效果

 

 

 

我們對新鮮的小鼠腎臟組織進(jìn)行了實驗，結(jié)果顯示，使用死細(xì)胞去除緩沖液處理后，單細(xì)胞懸液的細(xì)胞活率參數(shù)明顯提升，從39.67%提升至93.72%。從數(shù)據(jù)分析結(jié)果可以看出，處理之后，測得的基因中位數(shù)明顯改善，從537提升至2594。

 

 

測試流程：

 

 

 

 

 

 

 

測試結(jié)果：

 

 

 

 

利用死細(xì)胞去除緩沖液處理單細(xì)胞懸液前后樣本質(zhì)檢結(jié)果

 

 

使用死細(xì)胞去除緩沖液處理單細(xì)胞懸液前后樣本細(xì)胞直徑分布

 

 

 

使用死細(xì)胞去除緩沖液處理單細(xì)胞懸液前后樣本測序數(shù)據(jù)結(jié)果

 

 

 

產(chǎn)品宣傳頁

 

 

 

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產(chǎn)品說明書

 

 

 

 

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訂購信息

 

 

 

 

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品規(guī)格	目錄價格
死細(xì)胞去除緩沖液	BA3338-10	10 rxns	¥1,699
	BA3338-40	40 rxns	¥6,199

 

 

 

 

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產(chǎn)品 FAQ

 

 

1.    Q：處理高死細(xì)胞率（＞50%）的腫瘤組織單細(xì)胞懸液時，離心后發(fā)現(xiàn)活細(xì)胞層（上層液體）中仍夾雜大量死細(xì)胞，死細(xì)胞去除率僅 60%，遠(yuǎn)低于預(yù)期的 90%，是什么原因?qū)е碌模吭撊绾蝺?yōu)化操作？

A：高死細(xì)胞率樣本中死細(xì)胞易聚集形成團塊，隨活細(xì)胞上浮。優(yōu)化方法：①步驟 2 重懸細(xì)胞時，用含 2% FBS 的 1640 反復(fù)吹打 20 次，確保死細(xì)胞團塊分散；②鋪層前將混合液通過 20μm 細(xì)胞篩過濾 1 次，去除＞20μm 的死細(xì)胞團；③離心時將轉(zhuǎn)速從 700×g 提高至 750×g，延長離心時間至 25 分鐘，增強死細(xì)胞沉降效果，可使死細(xì)胞去除率提升至 85% 以上。

 

2.    Q：按步驟將 1mL 混合液（細(xì)胞懸液 + DCRS）鋪在 2mL DCRS 上層時，液體沿管壁快速流下，導(dǎo)致兩層立即混合，無法形成清晰分層，該如何控制鋪層速度避免混層？

A：混層多因鋪層時液體沖擊力度過大。解決方法：①選擇 1mL 低吸附槍頭，將槍頭尖端貼近 2mL DCRS 液面（距離＜1mm）；②緩慢推動槍頭推桿，控制液體流速（1mL 混合液鋪層時間≥30 秒），避免液體沖擊管壁；③若使用 15mL 離心管，可先將離心管傾斜 45°，沿傾斜管壁緩慢滴加混合液，待液體沿管壁流至 DCRS 表面后再放平試管，可使分層成功率提升至 95%。

 

3.    Q：離心后觀察到溶液僅分成 2 層（上層液體、下層沉淀），未出現(xiàn)中間過渡層，且活細(xì)胞回收率僅 50%，是什么原因?qū)е路謱硬煌暾吭撊绾握{(diào)整離心參數(shù)？

A：分層不完整多因離心機加速度 / 減速度未設(shè)為 “居中”，或離心溫度偏差。調(diào)整方法：①確認(rèn)離心機參數(shù)：加速度 “5”、減速度 “5”（居中檔位），若離心機無數(shù)字檔位，選擇 “中等” 模式，避免高速升降速破壞分層；②離心溫度嚴(yán)格控制在 4℃（溫差 ±1℃），溫度過高會降低 DCRS 密度差；③補加 0.5mL DCRS 至下層，重新鋪層離心，可使分層完整度恢復(fù)。

 

4.    Q：步驟 5 用含 5% FBS 的 PBS 稀釋至 10mL 后，4℃、450×g 離心 5 分鐘，發(fā)現(xiàn)活細(xì)胞沉淀松散，棄上清時約 30% 細(xì)胞隨上清流失，該如何獲得致密沉淀？

A：沉淀松散因哺乳動物活細(xì)胞表面含黏附分子，相互排斥難以聚集。解決方法：①將離心轉(zhuǎn)速提高至 500×g，離心時間延長至 8 分鐘；②稀釋時在 10mL PBS 中加入 50μL 1% 多聚賴氨酸（自備，無細(xì)胞毒性），中和細(xì)胞表面負(fù)電荷；③離心后保留 200μL 上清與沉淀混合，避免小體積細(xì)胞流失，可使沉淀致密性提升 65%，細(xì)胞損失率降至 10% 以下。

 

5.    Q：試劑盒開封后，DCRS 在 4℃避光保存 14 個月，使用時發(fā)現(xiàn)死細(xì)胞去除率從 90% 降至 65%，是試劑失效了嗎？該如何快速驗證試劑有效性？

A：DCRS 4℃有效期為 1 年，超期后密度成分易降解。驗證方法：①取 1mL DCRS 與 1mL 含 5% FBS 的 PBS 混合，按步驟鋪層 1mL 含已知死細(xì)胞率（50%）的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞懸液，4℃、700×g 離心 20 分鐘；②若離心后活細(xì)胞層死細(xì)胞率仍＞30%，說明試劑失效；③若死細(xì)胞率在 20%-30% 之間，可將 DCRS 用量增加至 2.5mL（常規(guī) 2mL），死細(xì)胞去除率可提升至 80%，勉強用于基礎(chǔ)實驗（不建議單細(xì)胞測序）。

 

6.    Q：處理含大量紅細(xì)胞的脾臟單細(xì)胞懸液時，離心后活細(xì)胞層與紅細(xì)胞層界限模糊，無法準(zhǔn)確吸取活細(xì)胞，該如何區(qū)分兩層邊界？

A：界限模糊因紅細(xì)胞密度與活細(xì)胞接近，易混入活細(xì)胞層。區(qū)分方法：①離心后將離心管置于冰上靜置 5 分鐘，利用溫度差促進(jìn)紅細(xì)胞沉降，使邊界清晰；②用 100μL 低吸附槍頭沿管壁輕輕觸碰液面，緩慢下移至 “半透明 - 淡紅色過渡區(qū)”，此為活細(xì)胞層上界，僅吸取上界以下 800μL 液體，避免吸入下方紅色紅細(xì)胞層，可使活細(xì)胞純度提升至 85% 以上。

 

7.    Q：步驟 2 混合細(xì)胞懸液與 DCRS 時，吹打過度導(dǎo)致產(chǎn)生大量氣泡，離心后氣泡黏附在活細(xì)胞層表面，影響細(xì)胞吸取，該如何消除氣泡？

A：氣泡會破壞 DCRS 分層結(jié)構(gòu)，消除方法：①混合時用 1mL 低吸附槍頭，吸液時緩慢插入液面下（避免吸入空氣），吹打次數(shù)控制在 5 次以內(nèi)；②若已產(chǎn)生氣泡，將混合液靜置 10 分鐘，氣泡會聚集在液面頂部，用無菌吸管輕輕吸除氣泡，再進(jìn)行鋪層；③鋪層后在離心管管口覆蓋無菌保鮮膜（留 1 個小孔排氣），避免離心時氣泡擴散，可減少氣泡對分層的影響。

 

8.    Q：用戶自備的水平離心機最大轉(zhuǎn)速僅 600×g（低于推薦的 700×g），使用時發(fā)現(xiàn)死細(xì)胞沉降不充分，該如何調(diào)整操作彌補轉(zhuǎn)速不足？

A：轉(zhuǎn)速不足需通過延長離心時間和增加 DCRS 用量彌補。調(diào)整方法：①將 DCRS 下層用量從 2mL 增加至 2.5mL，增強密度差；②離心時間從 20 分鐘延長至 30 分鐘，確保死細(xì)胞充分沉降；③鋪層前將混合液在 4℃靜置 15 分鐘，預(yù)處理促進(jìn)死細(xì)胞初步沉降，可使死細(xì)胞去除率從 60% 提升至 80%，滿足基礎(chǔ)實驗需求。

 

9.    Q：步驟 7 用含 5% FBS 的 PBS 重懸細(xì)胞時，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞懸液中出現(xiàn)少量白色絮狀物（非死細(xì)胞），干擾后續(xù)細(xì)胞計數(shù)，該如何去除這些絮狀物？

A：白色絮狀物多為 DCRS 與 FBS 反應(yīng)產(chǎn)生的蛋白沉淀（非污染）。去除方法：①重懸后將細(xì)胞懸液通過 20μm 細(xì)胞篩過濾 1 次，絮狀物會被截留；②若過濾后仍有微量絮狀物，加入 50μL 0.1% DNase I（自備），37℃孵育 5 分鐘，降解可能殘留的核酸類絮狀物；③過濾后用少量 PBS 沖洗篩網(wǎng)，合并沖洗液，可使細(xì)胞懸液澄清度提升 90%，計數(shù)誤差降至 5% 以下。

 

10.    Q：處理神經(jīng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液時，按步驟操作后活細(xì)胞活性從 80% 降至 55%，是什么原因?qū)е律窠?jīng)細(xì)胞活性下降？該如何優(yōu)化操作保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞？
A：神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞膜脆弱，易受 DCRS 和離心力損傷。優(yōu)化方法：①步驟 2 重懸細(xì)胞時，用含 2% FBS 的 1640 替代常規(guī) RPMI 1640，并加入 50μL 1% BSA（自備），增強神經(jīng)細(xì)胞膜保護(hù)；②離心轉(zhuǎn)速降至 650×g（常規(guī) 700×g），離心時間縮短至 18 分鐘，減少離心力對細(xì)胞的沖擊；③步驟 5 稀釋時用含 10% FBS 的 PBS（常規(guī) 5% FBS），補充細(xì)胞營養(yǎng)，可使神經(jīng)細(xì)胞活性維持在 70% 以上。